Как настроить систему наблюдения в фазовом контрасте на Olympus IX73

Фазово-контрастная микроскопия — один из самых востребованных методов при наблюдении живых, неокрашенных клеток и биологических объектов. Эта техника позволяет визуализировать тонкие внутренние структуры, не прибегая к фиксации или окрашиванию, что делает её незаменимой в клеточной биологии, фармацевтических исследованиях и при работе с культурами in vitro.

Микроскоп Olympus IX73, будучи исследовательской моделью с инвертированной конфигурацией, идеально подходит для реализации фазово-контрастной системы благодаря своей модульности, высокой оптической стабильности и поддержке современных аксессуаров. Однако правильная настройка системы требует точного соблюдения алгоритма действий и внимания к деталям. Ниже представлен подробный пошаговый разбор, как грамотно организовать фазово-контрастное наблюдение на IX73.

Алгоритм инсталляции фазовых пластин и конденсора для корректного формирования изображения

Для реализации фазового контраста необходимо использовать специальный фазово-контрастный объектив с фазовой пластиной и соответствующую фазовую аннулярную диафрагму в конденсоре.

Шаг 1: Установка фазовых объективов

• Установите в револьверный держатель объективы с маркировкой «Ph» (например, UPLFLN 10x Ph1, UPLFLN 20x Ph1, LCPlanFL 40x Ph2).
• Убедитесь, что фазовая пластина интегрирована в объектив — она выглядит как затемненное кольцо в задней фокальной плоскости объектива.

Шаг 2: Монтаж фазового конденсора

• Для инвертированного микроскопа Olympus IX73 используется фазово-контрастный слайдер или турель с аннулярными диафрагмами.
• Совместите каждый объектив с соответствующей аннулярной вставкой (например, Ph1 — для 10x и 20x, Ph2 — для 40x).

Важно: Приобретая Olympus IX73 в компании Микроптика, вы можете сразу заказать необходимые фазовые вставки и объективы с полной совместимостью, а также получить помощь специалистов по установке и юстировке системы.

Шаг 3: Центровка аннулярной диафрагмы

• После установки нужной вставки используйте винты центрировки (обычно два винта сбоку турели или слайдера).
• С помощью телескопической окулярной линзы или Bertrand линзы совместите аннулярную диафрагму с фазовой пластиной объектива.

Специфика регулировки освещения и выравнивания оптических осей

Фазово-контрастная система особенно чувствительна к качеству и выравниванию освещения. Любое отклонение приводит к потере контраста или появлению артефактов.

Настройка Кёлера

• Включите светодиодную подсветку IX73, установите среднюю интенсивность.
• Введите апертуру конденсора в поле зрения, отрегулируйте её с помощью ирисовой диафрагмы.
• Настройте положение поля и апертурной диафрагм так, чтобы они были коаксиальны — это обеспечивает равномерное освещение.

Коррекция центровки

• Используйте встроенные винты механической центрировки источника света.
• Убедитесь, что световой конус строго совпадает с осью объектива.
• При необходимости скорректируйте наклон зеркал (в моделях со встроенной системой зеркального распределения).

Методы проверки результата и устранения артефактов

Проверка качества изображения должна включать как визуальную, так и техническую оценку.

Проверка изображения

• Поместите живую клеточную культуру (например, клетки HeLa или fibroblasts) в чашку Петри на предметный столик.
• Оцените резкость и контраст внутриклеточных структур.
• При корректной настройке вы увидите отчетливые границы мембран, ядра и органеллы без паразитных ореолов.

Частые проблемы и решения

• Слабый контраст — проверьте совместимость фазовой вставки и объектива, проведите юстировку заново.
• Ореолы вокруг объектов — может быть признаком несовпадения фазовой аннулярной диафрагмы и фазовой пластины.
• Неравномерное освещение — повторите настройку Кёлера, проверьте положение источника света.

Рекомендации по сохранению параметров для быстрой перенастройки между режимами наблюдения

На Olympus IX73 можно легко переключаться между фазовым контрастом, светлым полем и флуоресценцией. Чтобы сохранить настройки:

• Отметьте положения фазовых вставок на турели/слайдере с помощью цветовых меток или наклеек.
• Используйте профили освещения в программном обеспечении (если используется модуль CellSens) для сохранения уровней яркости и диафрагм.
• При смене объективов — не забудьте синхронизировать диафрагму с новым увеличением, либо подготовьте шпаргалку с номерами фазовых вставок и соответствующих объективов.

Также рекомендуется фиксировать положение предметного столика и использовать шаблоны для чашек/слайдов, чтобы ускорить возвращение к нужному положению.